से वर्णक निकालने में सक्षम होने के लिए क्लोरोप्लास्ट एक आइसोलेशन बफर में निलंबित हैं। क्लोरोप्लास्ट से वर्णक निकालने में सक्षम होने के लिए, हमें पहले बफर से छुटकारा पाना होगा। क्लोरोप्लास्ट को बफर से अलग करने का सबसे अच्छा तरीका क्या है? अलग करने के लिए एक अपकेंद्रित्र का उपयोग करें
आप क्लोरोप्लास्ट को कैसे अलग करते हैं?
क्लोरोप्लास्ट आइसोलेशन विधि में, कोशिका की दीवार को यांत्रिक रूप से ब्लेंडर या होमोजेनाइज़र का उपयोग करके तोड़ा जाता है। फिर अखंड पत्ती ऊतक और कोशिकीय मलबे को छानकर हटा दिया जाता है। क्लोरोप्लास्ट एक परकोल ग्रेडिएंट का उपयोग करके सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा एकत्र किए जाते हैं।
क्लोरोप्लास्ट आइसोलेशन बफर कैसे बनाते हैं?
1X क्लोरोप्लास्ट आइसोलेशन बफर की आवश्यक मात्रा तैयार करें 2X बफर स्टॉक 1:1 को dH2O पानी के साथ पतला करें 1X क्लोरोप्लास्ट के प्रति एमएल 10% बीएसए समाधान के 10 μL जोड़ें अलगाव बफर। उपयोग करने से ठीक पहले, क्लोरोप्लास्ट अलगाव बफर के 1 एमएल प्रति डीटीटी के 1 माइक्रोन जोड़ें। इस बफ़र को 'पूर्ण बफ़र' के रूप में लेबल करें।
क्लोरोप्लास्ट आइसोलेशन बफर में क्या होता है?
डीएनए आइसोलेशन बफर में 100 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50 mM EDTA, और 1 mM DTT शामिल थे क्लोरोप्लास्ट लाइसे को इनक्यूबेट करके प्राप्त किया गया था डीएनए अलगाव बफर के 8 मिलीलीटर, 1.5 मिलीलीटर 20% एसडीएस, 20 μl 2-मर्कैप्टोएथेनॉल और 30 μl प्रोटीनेस के (10 मिलीग्राम / एमएल) के साथ क्लोरोप्लास्ट गोली 55 डिग्री सेल्सियस पर 4 घंटे के लिए एक अपकेंद्रित्र ट्यूब में।
क्लोरोप्लास्ट आइसोलेशन प्रोटोकॉल में पालक के पत्ते को समरूप बनाने के लिए उपयोग किए जाने वाले बफर का pH क्या है?
पालक में अच्छे क्लोरोप्लास्ट होते हैं और वे आसानी से अलग हो जाते हैं। आपको पत्तों को फटने से बचाने के लिए 0.1 M फॉस्फेट बफर, pH 7.5 और 0.5 M सुक्रोज के साथ ठंडे ब्लेंडर में डालना होगा।
