यदि आपका प्रोटीन आपके एंटीबॉडी के समान आकार का नहीं है, तो आप 0.1M ग्लाइसिन, pH2-3 के साथ एल्यूट कर सकते हैं और फिर SEC का उपयोग करके एंटीबॉडी से रुचि के प्रोटीन को अलग कर सकते हैं। (सुपरडेक्स 200 की तरह)।
एल्यूटिंग प्रोटीन क्या है?
प्रोटीन एक कार्बनिक विलायक की बढ़ती मात्रा के एक ढाल एसीटोनिट्राइल जैसेद्वारा सुसंस्कृत होते हैं। प्रोटीन उनकी हाइड्रोफोबिसिटी के अनुसार उत्सर्जित होते हैं। एचपीएलसी द्वारा शुद्धिकरण के बाद प्रोटीन एक ऐसे घोल में होता है जिसमें केवल वाष्पशील यौगिक होते हैं, और इसे आसानी से लियोफिलाइज़ किया जा सकता है।
प्रोटीन का पीएच स्तर कम क्यों होता है?
प्रोटीन ए से क्षालन के लिए कम पीएच बफर का उपयोग उत्पाद एकत्रीकरण में योगदान करने के लिए जाना जाता है फिर भी, साक्ष्य के अधिक सीमित सेट से पता चलता है कि कम पीएच एकमात्र नहीं हो सकता है प्रोटीन में एकत्रीकरण का कारण एक क्रोमैटोग्राफी, बल्कि, प्रक्रिया के अन्य पहलुओं में महत्वपूर्ण योगदान हो सकता है।
रेफरेंस कैसे किया जाता है?
विश्लेषणात्मक और कार्बनिक रसायन विज्ञान में, क्षालन एक सामग्री को एक विलायक से धोकर दूसरे से निकालने की प्रक्रिया है; कब्जा किए गए आयनों को हटाने के लिए लोड किए गए आयन-एक्सचेंज रेजिन की धुलाई के रूप में। … विलायक के अणुओं द्वारा विश्लेषण को विस्थापित करने के बाद, विश्लेषण के लिए विश्लेषण को कॉलम से बाहर किया जा सकता है।
कोइप के लिए आपको कितने एंटीबॉडी की आवश्यकता है?
नियमित सह-आईपी प्रयोगों के लिए, मैंने जिस एंटीबॉडी का उपयोग किया है वह 2ug से अधिक नहीं है (मेरे सेट में, 1.4 -2.0ug एंटीबॉडी 2500-5000ug को कैप्चर करने के लिए पर्याप्त है प्रोटीन लाइसेट।) लेकिन यह अभी भी आपके नमूनों में आपके लक्षित प्रोटीन के अभिव्यक्ति स्तरों पर निर्भर है, इसलिए आपको शायद कुछ संशोधन करने होंगे।
How Much Protein Do You Need? Explained by Dr. Berg
